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SD大鼠乳鼠心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞原代分離培養(yǎng)方法

1.將新生24h的SD大鼠用75%乙醇浸泡5min，開胸，取出心臟后于含有雙抗的預(yù)冷過的D-HANKS中漂洗兩遍，移入超凈臺。2.仔細(xì)剪除大血管，左右心房及右心室和室間隔，保留左心室，去除內(nèi)、外膜，PBS清洗。3.用眼科剪將心室肌剪碎至約1mm3，滴加1ml胎牛血清，均勻接種于6cm細(xì)胞培養(yǎng)皿內(nèi)，組織塊間隔1-2mm，放入5%CO2，37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。4.4小時(shí)后去除培養(yǎng)皿，加入3ml含有20%FBS和1%雙抗的H-DMEM培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。5.一般情況下48小時(shí)后可見...

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新生SD大鼠大腦皮層神經(jīng)元原代分離培養(yǎng)方法

一.實(shí)驗(yàn)方法1.多聚賴氨酸（Poly-D-Lysine）包被培養(yǎng)板的制備：原代分離進(jìn)行前一天，用PBS緩沖液配制終濃度為0.1mg/ml的多聚賴氨酸工作液，0.22μm濾膜過濾除菌，于超凈工作臺內(nèi)吸取1ml加入六孔板內(nèi)，確保覆蓋板底，靜置孵育30min后吸出（可回收反復(fù)使用2-3次），用無菌水清洗培養(yǎng)板，置于超凈臺內(nèi)晾干，照紫外過夜。2.次日，取出生24h以內(nèi)的SD大鼠，75%乙醇浸泡消毒5min。3.棉球吸干乳鼠體表的乙醇，迅速斷頭，浸泡于冰冷的含有2%雙抗的PBS緩沖液中...

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原代細(xì)胞分離培養(yǎng)都有哪幾種方法？

研究中常用的細(xì)胞系/株系是現(xiàn)成的，我們只需要進(jìn)行細(xì)胞傳代和種子保存。然而，這些細(xì)胞系往往因長期體外培養(yǎng)而失去原有的生物學(xué)特性，對藥物治療的反應(yīng)差距越來越大。因此，越來越多的人選擇原代細(xì)胞。來源于胚胎、組織、器官和外周血，經(jīng)特殊分離方法制備的原代培養(yǎng)細(xì)胞稱為原代細(xì)胞。原代細(xì)胞培養(yǎng)，也稱為原代培養(yǎng)，是從供體獲得的組織細(xì)胞在體外的培養(yǎng)。原代細(xì)胞是接近和最能反映體內(nèi)生長特性的細(xì)胞，適用于藥敏試驗(yàn)、細(xì)胞分化等實(shí)驗(yàn)研究。原代細(xì)胞分離培養(yǎng)都有哪幾種方法？1、組織培養(yǎng)法組織培養(yǎng)是一種常見、簡...

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充質(zhì)干細(xì)胞涉及的研究竟然這么多

充質(zhì)干細(xì)胞是人體內(nèi)一類具有自我更新和多向分化潛能的原始細(xì)胞群。根據(jù)遺傳來源的分類，干細(xì)胞可分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞。其中，胚胎干細(xì)胞具有發(fā)育全能性，是干細(xì)胞研究和應(yīng)用中具吸引力的一種。然而，關(guān)于胚胎干細(xì)胞的研究一直存在倫理爭議。與胚胎干細(xì)胞相比，成體干細(xì)胞具有獲取方便、致瘤風(fēng)險(xiǎn)低、無倫理爭議等優(yōu)點(diǎn)。因此，成體干細(xì)胞已成為干細(xì)胞臨床應(yīng)用研究的主要對象。在成體干細(xì)胞的許多臨床研究中，充質(zhì)干細(xì)胞是最多的。間充質(zhì)干細(xì)胞是一種來源于中胚層的成體干細(xì)胞，具有自我更新和多向分化的潛能。間...

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原代細(xì)胞分離培養(yǎng)有哪些注意事項(xiàng)？

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)有哪些注意事項(xiàng)？1、組織塊培養(yǎng)法（1）接種后的前3天，觀察和移動(dòng)時(shí)注意不要引起液體振蕩。避免頻繁的翻倒和振動(dòng)，否則組織塊不易附著在瓶壁上或附著后脫落飄浮。（2）加入的培養(yǎng)基不宜過多，以免浸泡的組織因輕微波動(dòng)而脫落。（3）細(xì)胞向外遷移時(shí)，注意記錄并清除漂浮的組織塊和殘留細(xì)胞。它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會影響原代細(xì)胞的生長。（4）為促進(jìn)組織塊盡快貼在培養(yǎng)瓶上，可在種植前在培養(yǎng)瓶底壁涂上一層薄薄的膠原蛋白。2、貼壁原代細(xì)胞（1）原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的分離細(xì)胞一次接觸體外環(huán)境時(shí)，...

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充質(zhì)干細(xì)胞的醫(yī)療價(jià)值真的很高

充質(zhì)干細(xì)胞是一種早期未分化細(xì)胞，具有自我更新、自我復(fù)制、無限增殖和多向分化潛能等特點(diǎn)。它們可以分泌細(xì)胞因子，減輕炎癥，減少組織細(xì)胞凋亡，促進(jìn)內(nèi)源性組織器官干祖細(xì)胞的增殖，進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)，從而達(dá)到作為種子細(xì)胞修復(fù)組織器官的效果。經(jīng)過連續(xù)傳代和冷凍保存后，仍具有多向分化潛能，被醫(yī)學(xué)界稱為“萬能細(xì)胞”。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)充質(zhì)干細(xì)胞實(shí)際上是一組具有高自我更新能力和不同分裂增殖能力的多能干細(xì)胞。它們可以在體外培養(yǎng)和擴(kuò)增，也可以在特定條件下分化成神經(jīng)細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、脂...

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腸道腫瘤類器官的研究與應(yīng)用

ONCOGENESIS|腸道腫瘤類器官的應(yīng)用研究類器官（Organoids）類器官是一項(xiàng)創(chuàng)新性較高的研究技術(shù)，近幾年來受到科研人士的追捧和廣泛好評。目前，我們國家在政策層面也給予了大力地支持。2021年科技部發(fā)布的“十四五”國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃“干細(xì)胞研究與器官修復(fù)”重點(diǎn)專項(xiàng)中也特別提到疾病類器官模型。什么是類器官（Organoids）？類器官屬于三維（3D）細(xì)胞培養(yǎng)物，包含其代表器官的一些關(guān)鍵特性。類體外培養(yǎng)系統(tǒng)包括一個(gè)自我更新干細(xì)胞群，可分化為多個(gè)器官特異性的細(xì)胞類型，與對應(yīng)...

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細(xì)胞污染的辨別

細(xì)胞污染的辨別細(xì)胞污染有很多種不同的類型，不同情況的細(xì)胞污染其表現(xiàn)也不同，檢測方法也有所不同。不過大部分的細(xì)胞污染，用肉眼加鏡檢就可以解決啦！細(xì)胞污染一般分細(xì)菌污染，真菌污染，支原體污染，黑膠蟲等。1.細(xì)菌污染pH升高，培養(yǎng)基變黃，培養(yǎng)基嚴(yán)重渾濁，鏡下可見細(xì)菌游動(dòng)。2.真菌污染培養(yǎng)液短期內(nèi)多不渾濁，有肉眼可見漂浮物，鏡下細(xì)胞間有菌絲體，生長變慢，時(shí)間長細(xì)胞死亡。3.支原體污染支原體污染后，細(xì)胞生長一般無可見變化，在光學(xué)顯微鏡下不可見，極易被忽視，往往直到污染非常嚴(yán)重時(shí)才能發(fā)現(xiàn)...

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